三维细胞培养实验库如何建立?
进行三维细胞培养时,首先会进行三维细胞培养实验库的建立,但是建立三维细胞培养实验库并不是一个简单的过程,也不是简单的一句话,它需要准备各种各样的事项,那么如何才能够建立起三维细胞培养库呢?http://www.cls-china.com.cn/uploadfile/ueditor/image/20190822/1566470747336535.jpg
如何正确地建立三维细胞培养实验室细胞库?
三维细胞培养研究人员在进行细胞实验时,哪些原因会导致科研数据的波动与差错?
1.细胞微生物污染(如:支原体,细菌,真菌,病毒等)
2.细胞交叉污染
3.细胞基因突变
4.细胞衰老
5.人为操作失误
平时,研究人员细胞的来源有三种,一种是直接从商业化公司(如ATCC、DSMZ、中科院细胞所)购买,另一种为自己从原代组织分离,还有一种是从其他实验室或科研人员处获取。
既然如此方便,我们为什么要自己建立细胞库呢?有何意义?
三维细胞培养细胞库可以有效保持贮存细胞的生物学效用和功能,为科研实验提供检定合格、质量稳定、可持续获得的细胞。
1.节省实验室空间、时间、经费
2.若实验失败,还有重来的机会
3.确保实验重复的一致性
4.确保未来实验的连贯性
因此实验室有必要建立一个安全、规范、稳定、可追溯的细胞库,我们需要从源头保证整个研究实验的规范性。
目前,世界上较权威的细胞库机构或者研究院都采用三级细胞库管理模式,即:原始细胞库(PCB,PrimaryCellBank),主细胞库(MCB,MasterCellBank),工作细胞库(WCB,WorkingCellBank)。
1.原始细胞库(PCB,PrimaryCellBank)
原始细胞库(PCB,PrimaryCellBank),又名细胞种子(CellSeed)或初级细胞库(Pre-masterCellBank),由一个原始细胞群体发展成为传代稳定的细胞群体,或者经过克隆培养形成的均一细胞群体,经检定证明合格。将一定数量、成分均一的细胞悬液定量装于细胞冻存管,与液氮或-130℃以下冻存,即为原始细胞库,供建立主细胞库使用。
2.主细胞库(MCB,MasterCellBank)
主细胞库(MCB,MasterCellBank)指的是,原始细胞库细胞传代增殖后均匀混合成一批,定量分装,保存于液氮或-130℃以下。这些细胞经检定合格后,即为主细胞库,供建立工作细胞库使用。
3.工作细胞库(WCB,WorkingCellBank)
工作细胞库(WCB,WorkingCellBank)是经过主细胞库传代增殖,达到一定代次水平的细胞,混合后制成一批均质细胞悬液,定量分装于一定数量的细胞冻存管,保存于液氮或-130℃以下备用。这些细胞经检定证明合格后,即为工作细胞库。
不同的细胞系传代能力不同,因此,研究人员须根据自己的细胞系确定工作细胞的传代次数。
细胞库的检定
上面我们介绍过在进行各级细胞库的建立时,都要进行检定,合格后才可成为相应细胞库。细胞检定主要包括以下几个方面:细胞鉴别,细菌、真菌检查,支原体检查,细胞内外源病毒因子检查,致瘤性检查,必要时还须进行细胞染色体、细胞生长特性、细胞均一度及稳定性检查。
三维细胞培养库是需要专业的人来操作的,因为稍不注意都会导致整个细胞库的失败。多年来康宁一直都在研究三维细胞培养的相关问题,其中也包括了细胞库的建立,取得相当好的成效,可以去了解一下。
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