球体培养的实验步骤是怎样的？

随风_YA2H2

　　对于一个初次接触细胞培养的学生来说，在做一些简单的培养模型时也会遇到一些问题，比如球体培养，虽然需要用的材料很少，准备工作也并不复杂，但一些问题仍然要注意。为了提高大家实验的稳定性，小编今天就来简单介绍下，球体培养的实验步骤是怎样的？

　　1、琼脂铺底的培养瓶。30 ml无菌培养瓶，每瓶中加5 ml 2 %琼脂培养基，冷却，形成平坦底层后备用；

　　2、取生长状态良好已联接成片的细胞，用弯头吸管伸入瓶内，把细胞层纵横割划成若干小区后，倒出培养液；

　　3、加入0.25 %的胰蛋白酶液，在倒置显微镜下边消化边观察，当细胞小区边缘微卷起后便立即终止消化，倒出消化液，用Hanks轻轻漂洗一次（不洗亦可），加入新培养液3——5 ml，用吸管把已松动的细胞片吸打下来；分装入1——3 个含2 %琼脂培养基底层的培养瓶中，置温箱继续培养，数日后便可生长成细胞球体；

　　4、换液。培养1——2 日后，如需换液，微倾斜培养瓶，令培养液集于培养瓶底角，停片刻，待球体细胞下沉后，吸除部分培养液，再补充新培养液。

　　此外，细胞球体培养也可和单层细胞混合培养，便于研究两种不同细胞的相互影响。

　　1、先做单层培养，待细胞长成单层细胞后，把2 %琼脂培养液注入瓶内，令其在单层细胞上面形成琼脂层。注意在加琼脂时，要使琼脂冷却到快要凝固前再注入瓶内，以避免过热损伤细胞。

　　2、当琼脂脂固后，再把已准备好的另一种细胞球体培养液接种在上面，便形成琼脂层下为单层细胞，上层为球体细胞的混合培养。下层细胞生活在琼脂培养液中，既能从琼脂培养液中也能从上层培养液中获取营养；因琼脂的限制却不易与上层球体细胞相混或干扰，但相互却能发生影响，可借以研究细胞相互关系。

　　关于球体培养的实验步骤就先介绍到这里，在做混合培养时，小编推荐康宁球形板，这是适合多种细胞生长的微环境体系——3D共培养模型，为临床药物研究提供了一种更加可靠便利的工具，当然，也可以扩展到其他更为广泛的领域。